Центрифугирование – отделение жидкой части крови (сыворотки, плазмы) от клеток (эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов), которое применяется с целью подготовки биоматериала для последующего проведения различных анализов. Выполняется с помощью специального лабораторного оборудования – центрифуги.
Правила центрифугирования крови
Чтобы исключить возможность повреждения пробирок во время центрифугирования и получить качественный биоматериал для дальнейшего исследования, необходимо соблюдать определенные правила.
- Во время центрифугирования на каждое «плечо» ротора центрифуги должна приходиться одинаковая нагрузка. Для этого лаборант перед началом процесса центрифугирования должен убедиться, что вакуумные пробирки, стаканы для них, вкладыши, устанавливаемые на каждое «плечо», имеют одинаковую форму, величину и вес.
- Если центрифугированию подлежат пробирки с разным объемом крови, то необходимо в симметрично расположенные гнезда на противоположных «плечах» ротора устанавливать одинаковые по весу пары пробирок. Если пробирок с одинаковым объемом крови недостаточно, достичь симметрии можно установив в пустое гнездо пробирку с аналогичным объемом воды.
- Устанавливая вакуумные пробирки в стаканы для центрифугирования, следует обращать внимание на то, чтобы крышка пробирки не соприкасалась со стенками стакана.
- Проводить центрифугирование пробирок с разделительным гелем нужно при температуре 24 °C. После формирования разделительного барьера пробирки нельзя подвергать повторному центрифугированию.
Режимы центрифугирования крови
Центрифугированию подвергаются различные пробы крови (с добавлением цитрата, гепарина, разделительного геля), забираемые для разных целей. Для каждого вида проб существует свой режим центрифугирования, соблюдение которого гарантирует, что биоматериал для анализа будет подготовлен должным образом – клетки не повредятся, отцентрифугируется достаточный объем плазмы или сыворотки.
Режимы центрифугирования для разных проб крови стандартизированы и должны быть представлены в виде инструкции, содержащей следующие параметры:
- тип центрифуги;
- температура, при которой выполняется центрифугирование;
- величина центробежной силы (ВЦС), обеспечивающей разделение компонентов крови в заданных условиях;
- длительность центрифугирования.
Рекомендации по времени центрифугирования и ВЦС для различных типов пробирок
Величина центробежной силы (g) – один из основных параметров, на которые следует ориентироваться при выборе оптимальных условий центрифугирования. Обычно к паспорту центрифуги прикладывается таблица, в которой указана связь между скоростью вращения ротора (число оборотов в минуту) и ВЦС. Если она отсутствует, g можно рассчитать по следующей формуле:
g=1,118*0,00001*r*n2, где:
- r – радиус центрифуги (расстояние в см между осью ротора и центром пробирки в гнезде центрифуги);
- n – число оборотов в минуту.
Существуют общие рекомендации по времени центрифугирования и относительной центробежной силе (ОЦС) для разных типов вакуумных пробирок.
| Тип пробирки | Рекомендуемая ОЦС, g | Рекомендуемое время центрифугирования, мин. |
| Для исследований сыворотки | 1300 | 10 |
| Для исследований сыворотки с разделительным гелем | 1500-2000 | 10 |
| Для исследований плазмы с гепарином | 1300 | 10 |
| Для исследований плазмы с гепарином и разделительным гелем | 1500-2000 | 10 |
| С цитратом натрия для получения плазмы | 2000-2500 | 15 |
| Для исследования глюкозы | 1300 | 10 |
Однако разные производители могут давать свои рекомендации с учетом особенностей расходных материалов, которые используются для изготовления вакуумных пробирок.
Возможные проблемы при центрифугировании крови для получения сыворотки
| Проблема | Причины | Допущенные ошибки | Способ предотвращения | |
| Недостаточное разделение сыворотки и сгустка крови | Сыворотка отделилась слабо или не полностью, при этом барьер между сывороткой и сгустком не поврежден и хорошо определяется | Частичная или замедленная коагуляция, Неполное смешивание активатора свертывания и крови | Пробирка перевернута меньше 5-6 раз после взятия крови | Перевернуть пробирку с кровью 5-6 раз сразу после заполнения |
| Недостаточная выдержка биоматериала перед центрифугированием | Не соблюден рекомендуемый период (около 30 минут) перед центрифугированием | Соблюдать время отстаивания пробирки с кровью перед центрифугированием | ||
| Низкая скорость центрифугирования | Ускорение при центрифугировании меньше необходимого минимума | Убедиться в правильности заданных параметров | ||
| Неровный, плохо сформированный барьер, нечеткая граница отделения сыворотки. | Недостаточное время центрифугирования | Центрифугирование закончено раньше необходимого времени | При необходимом уровне нагрузки центрифугировать пробирку нужно не менее 10 минут | |
| Использование рефрижераторной центрифуги | Низкая температура центрифугирования | Установка температуры в пределах от 20 до 24 °C, термическая изоляция пробирки от центрифуги и ротора | ||
| Нарушена целостность пробирки | Нагрузка при центрифугировании превысила допустимый предел конструктивной устойчивости пробирки | Превышение допустимых норм нагрузки | Недопущение превышения предела нагрузки | |
| Не выставлен уровень центрифуги, наличие посторонних предметов в роторе | Перед запуском не проверен уровень ротора, отсутствуют амортизирующие подложки под пробирку | Установка амортизирующих прокладок центрифуги и ротора, устранение посторонних предметов из полости центрифуги | ||
| Внутри сепарационного барьера наблюдаются клеточные конгломераты | Замедленная либо неполная коагуляция, неполное смешивание активатора свертывания и крови | Пробирка перевернута меньше 5-6 раз после взятия крови | Перевернуть пробирку с кровью 5-6 раз сразу после забора | |
| Недостаточное время коагуляции перед центрифугированием | Не соблюден рекомендуемый период (около 30 минут) перед центрифугированием | Время отстаивания пробирки перед центрифугированием должно быть не менее 30 минут | ||
| В сыворотке крови присутствует фибрин | Избыточная нагрузка при центрифугировании | Ускорение при центрифугировании превысило допустимую норму | Соблюдать рекомендуемую норму ускорения | |
| Замедленная либо неполная коагуляция, неполное смешивание активатора свертывания и крови | Пробирка перевернута недостаточное количество раз (5-6) после взятия крови | Перевернуть пробирку с кровью 5-6 раз сразу после забора | ||
| Недостаточное время коагуляции перед центрифугированием | Не соблюден рекомендуемый период (около 30 минут) перед центрифугированием | Центрифугировать биоматериал не ранее, чем через полчаса после взятия | ||
| Ошибка в результатах исследования | Низкое качество сыворотки вследствие гемолиза | Слишком жесткое встряхивание либо перемешивание крови | Осторожное обращение с пробирками с биоматериалом, мягкое встряхивание или перемешивание | |
| Избыточное ускорение при центрифугировании | Ускорение при центрифугировании превысило допустимую норму | Соблюдать рекомендуемую норму ускорения | ||
Источники
- Базлов С.Б. К вопросу о получении плазмы, обогащенной тромбоцитами / С.Б. Базлов [и др.] // Инновационная медицина Кубани. – 2022. – №1. – С. 38-43.
- ГОСТ Р ИСО 6710-2009 Контейнеры для сбора образцов венозной крови одноразовые. Технические требования и методы испытаний.
- ГОСТ Р 59778-2021 Процедуры взятия проб венозной и капиллярной крови для лабораторных исследований.
- Гудер В. Диагностические пробы: от пациента до лаборатории. Влияние преаналитических факторов на качество результатов лабораторных исследований / В. Гудер [и др.], пер. с англ. В.В. Меньшикова. – 2010.
- Кишкун А.А. Организация преаналитического этапа при централизации лабораторных исследований / А.А. Кишкун А.А. [и др.] // Современная лабораторная диагностика. – 2013. – №2. – С. 2-68.
